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　　一、實(shí)驗(yàn)室要求

　　理想的組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該建立在安靜、清潔、遠(yuǎn)離污染源的地方，好在常年主風(fēng)向的上風(fēng)方向，盡量減少污染。規(guī)�；�生產(chǎn)的組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室好建在交通方便的地方，便于培養(yǎng)產(chǎn)品的運(yùn)送。

　　實(shí)驗(yàn)室設(shè)置的基本原則是：科學(xué)、、經(jīng)濟(jì)和實(shí)用。一個(gè)組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室必須滿足3個(gè)基本的需要：實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備（培養(yǎng)基制備、器皿洗滌、培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿滅菌）、無菌操作和控制培養(yǎng)。此外，還可根據(jù)從事的實(shí)驗(yàn)要求來考慮輔助實(shí)驗(yàn)室及其各種附加設(shè)施，使實(shí)驗(yàn)室更加完善。

　　植物組織培養(yǎng)是在嚴(yán)格無菌的條件下進(jìn)行的。要做到無菌的條件，需要一定的設(shè)備、器材和用具，同時(shí)還需要人工控制溫度、光照、濕度等培養(yǎng)條件。

　　二、實(shí)驗(yàn)室組成

　�。ㄒ唬┗�本實(shí)驗(yàn)室

　　基本實(shí)驗(yàn)室包括準(zhǔn)備室、洗滌滅菌室、無菌操作室、培養(yǎng)室、緩沖間，是組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)所必須具備的基本條件。如進(jìn)行工廠化生產(chǎn)，需3-4間實(shí)驗(yàn)用房。

　　1、準(zhǔn)備室（化學(xué)實(shí)驗(yàn)室）

　　功能：又叫化學(xué)實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行一切與實(shí)驗(yàn)有關(guān)的準(zhǔn)備工作：完成所使用的各種藥品的貯備、稱量、溶解、器皿洗滌、培養(yǎng)基配制與分裝、培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿的滅菌、培養(yǎng)材料的預(yù)處理等。

　　要求：好有20平方米左右。要求寬敞明亮、以便于放置多個(gè)實(shí)驗(yàn)臺(tái)和相關(guān)設(shè)備，方便多人同時(shí)工作；同時(shí)要求通風(fēng)條件好，便于氣體交換；實(shí)驗(yàn)室地面應(yīng)便于清潔，并應(yīng)進(jìn)行防滑處理。

　　規(guī)�；�生產(chǎn)準(zhǔn)備室一般設(shè)計(jì)成大的通間，使試驗(yàn)操作的各個(gè)環(huán)節(jié)在同一房間內(nèi)按程序完成。準(zhǔn)備試驗(yàn)的過程在同一空間進(jìn)行，便于程序化操作與管理，試驗(yàn)中減少各環(huán)節(jié)間的銜接時(shí)間，從而提高工作效率。此外還便于培養(yǎng)基配制、分裝和滅菌的自動(dòng)化操作程序設(shè)計(jì)，從而減少規(guī)�；�生產(chǎn)的人工勞動(dòng)，更便于無菌條件的控制和標(biāo)準(zhǔn)化操作體系的建立。

　　設(shè)備：準(zhǔn)備室應(yīng)具備實(shí)驗(yàn)臺(tái)、藥品柜、水池、儀器、藥品、防塵櫥（放置培養(yǎng)容器）、冰箱、天平、蒸餾水器、酸度計(jì)及常用的培養(yǎng)基配制用玻璃儀器等。

　　2、洗滌滅菌室

　　功能：完成各種器具的洗滌、干燥、保存、培養(yǎng)基的滅菌等。

　　要求：洗滌滅菌室根據(jù)工作量的大小決定其大小，一般面積控制在30-50平方米。在實(shí)驗(yàn)室的一側(cè)設(shè)置專用的洗滌水槽，用來清洗玻璃器皿。中央實(shí)驗(yàn)臺(tái)還應(yīng)配置2個(gè)水槽，用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大，可以購置一臺(tái)洗瓶機(jī)。準(zhǔn)備1-2個(gè)洗液缸，專門用于洗滌對(duì)潔凈度要求很高的玻璃器皿，地面應(yīng)耐濕并排水良好。

　　設(shè)備：水池、落水架、中央實(shí)驗(yàn)臺(tái)、高壓滅菌鍋、干燥滅菌器（如烘箱）等。

　　3、無菌操作室（接種室）

　　功能：也叫接種室，主要用于植物材料的消毒、接種、培養(yǎng)物的轉(zhuǎn)移、試管苗的繼代以及一切需要進(jìn)行無菌操作的技術(shù)程序，是植物離體培養(yǎng)研究或生產(chǎn)中關(guān)鍵的一步。

　　要求：接種室宜小不宜大，一般7～8平方米（10-20平方米）即可，其規(guī)模根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要和環(huán)境控制的難易程度而定。要求封閉性好，干爽安靜，清潔明亮，能較長(zhǎng)時(shí)間保持無菌，因此不易設(shè)在容易受潮的地方；地面、天花板及四壁盡可能密閉光滑，易于清潔和消毒；配置拉動(dòng)門，以減少開關(guān)門時(shí)的空氣擾動(dòng)；為便于消毒處理，地面及內(nèi)墻壁都應(yīng)采用防水和耐腐蝕材料；為了保持清潔，無菌室應(yīng)防止空氣對(duì)流。接種室要求在適當(dāng)位置吊裝 1～2盞紫外線滅菌燈，用以照射滅菌。好安裝一小型空調(diào)，使室溫可控，這樣可使門窗緊閉，減少與外界空氣對(duì)流。

　　一般新建實(shí)驗(yàn)室的無菌室在使用之前應(yīng)進(jìn)行滅菌處理，處理方法是甲醛和高錳酸鉀熏蒸，并需定期滅菌處理，還可用紫外線照射1-2h/周，或每次使用前照射10-30min。

　　設(shè)備：紫外燈、空調(diào)、解剖鏡、消毒器、酒精燈、接種器械（接種鑷子、剪刀、解剖刀、接種針），實(shí)驗(yàn)臺(tái)、和擱架，還有超凈工作臺(tái)和整套滅菌接種儀器、藥品等。

　　4、培養(yǎng)室

　　功能：對(duì)接種到培養(yǎng)瓶等器皿中的植物離體材料進(jìn)行控制條件下的培養(yǎng)，無論是研究性實(shí)驗(yàn)室還是生產(chǎn)性實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行培養(yǎng)的場(chǎng)所。要求：約需10-20平方米左右，培養(yǎng)室的大小可根據(jù)需要培養(yǎng)架的大小、數(shù)目、及其他附屬設(shè)備而定，其設(shè)計(jì)以充分利用空間和節(jié)省能源為原則�；�本要求是能夠控制光照和溫度，并保持相對(duì)的無菌環(huán)境，因此，培養(yǎng)室應(yīng)保持清潔和適度干燥；為滿足植物培養(yǎng)材料生長(zhǎng)對(duì)氣體的需要，還應(yīng)安裝排風(fēng)窗和換氣扇等培養(yǎng)室的換氣裝置；為節(jié)省能源和空間，應(yīng)配置適宜的培養(yǎng)架，并安裝日光燈照明。

　　研究用實(shí)驗(yàn)室，通�？筛鶕�(jù)光照時(shí)間設(shè)置成長(zhǎng)日照、中日照、短日照培養(yǎng)室，也可以根據(jù)溫度設(shè)置成高溫和低溫培養(yǎng)室，每一個(gè)培養(yǎng)室的空間不宜過大，便于對(duì)條件的均勻控制。為了控制培養(yǎng)室的溫度和光照時(shí)間及其強(qiáng)度，培養(yǎng)室的房間不要窗戶，但應(yīng)當(dāng)留一個(gè)通氣窗，并安上排氣扇。室內(nèi)溫度由空調(diào)控制，光照由日光燈控制。天花板和內(nèi)墻好用塑料鋼板裝修，地面用水磨石或瓷磚鋪設(shè)，一般要分兩間，一為光照培養(yǎng)室，一為暗培養(yǎng)室。培養(yǎng)室外應(yīng)有一預(yù)備間或走廊。

　　培養(yǎng)材料放在培養(yǎng)架上培養(yǎng)。培養(yǎng)架大多由金屬制成，一般設(shè)5層，低一層離地高約10cm，其他每層間隔30cm左右，培養(yǎng)架即高 1．7m左右。培養(yǎng)架長(zhǎng)度都是根據(jù)日光燈的長(zhǎng)度而設(shè)計(jì)，如采用40W日光燈，則長(zhǎng)1.3m，30W的長(zhǎng)lm，寬度一般為60cm。日光燈一般用40W，固定在培養(yǎng)架的側(cè)面或擱板的下面，每層有兩支日光燈，距離在20cm，光照強(qiáng)度為2000-3000lx。

　　培養(yǎng)室重要的因子是溫度，一般保持在20—27℃左右，具備產(chǎn)熱裝置，并安裝窗式或立式空調(diào)機(jī)。室內(nèi)濕度也要求恒定，相對(duì)濕度以保持在70%～80%為好，可安裝加濕器�？刂乒庹諘r(shí)間可安裝定時(shí)開關(guān)鐘，一般需要每天光照10-16h，也有的需要連續(xù)照明。

　　設(shè)備：培養(yǎng)架（控溫控光控濕）、搖床、轉(zhuǎn)床、自動(dòng)控時(shí)器、紫外燈、光照培養(yǎng)箱或人工氣候箱、生化培養(yǎng)箱、邊臺(tái)實(shí)驗(yàn)臺(tái)用于拍攝培養(yǎng)物生長(zhǎng)狀況，除濕機(jī)、顯微鏡、溫濕度計(jì)、空調(diào)等。

　　5、緩沖間

　　功能：是進(jìn)入無菌室前的一個(gè)緩沖場(chǎng)地，減少人體從外界帶入的塵埃等污染物。工作人員在此換上工作服、拖鞋，戴上口罩，才能進(jìn)入無菌室和培養(yǎng)室。 進(jìn)入無菌操作室前在此更衣?lián)Q鞋，以減少進(jìn)出時(shí)帶入接種室雜菌。

　　要求：緩沖間需3-5平方米，可建在準(zhǔn)備室外或無菌操作室外，應(yīng)保持清潔無菌；備有鞋架和衣帽掛鉤，并有清潔的實(shí)驗(yàn)用拖鞋、已滅菌過的工作服；墻頂用1-2盞紫外燈定時(shí)照射，對(duì)衣物進(jìn)行滅菌。 緩沖間好也安一盞紫外線滅菌燈，用以照射滅菌。緩沖間的門應(yīng)該與接種室的門錯(cuò)開，兩個(gè)門也不要同時(shí)開啟，以保證無菌室不因開門和人的進(jìn)出帶進(jìn)雜菌。

　　設(shè)備：1-2盞紫外燈、水槽、實(shí)驗(yàn)臺(tái)、鞋帽架、柜子、滅菌后的工作服、拖鞋、口罩。

　　三、儀器設(shè)備和器皿用具

　�。ㄒ唬┏Ｒ�(guī)設(shè)備

　　1、天平

　　組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室需要2-3臺(tái)不同精度的天平。

　　感量0.001g的天平（分析天平）和感量0.0001g的天平（電子天平）用于稱量微量元素和一些較高精確度的實(shí)驗(yàn)用品。

　　感量0.01g和0.1g的天平，用于大量元素母液配制和一些用量較大的藥品的稱量。

　　2、冰箱

　　各種維生素和激素類藥品以及培養(yǎng)基母液均需低溫報(bào)存，某些試驗(yàn)還需植物材料進(jìn)行低溫處理，一般普通冰箱即可。

　　3、酸度計(jì)

　　用于測(cè)定培養(yǎng)基及其它溶液的pH，一般要求可測(cè)定pH范圍1-14之間，精度0.01即可。

　　4、加熱器

　　用于培養(yǎng)基的配制。研究性實(shí)驗(yàn)室一般選用帶磁力攪拌功能的加熱器，規(guī)�；�大型實(shí)驗(yàn)室用大功率加熱和電動(dòng)攪拌系統(tǒng)。

　　5、其它

　　純水器、分裝設(shè)備

　�。ǘ�）滅菌設(shè)備

　　維持相對(duì)得無菌環(huán)境是組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的基本要求。

　　1、高壓滅菌鍋

　　用于培養(yǎng)基、玻璃器皿以及其它可高溫滅菌用品的滅菌，根據(jù)規(guī)模大小有手提式、立式、臥式等不同規(guī)格。

　　2、干熱消毒柜

　　用于金屬工具如鑷子、剪刀、解剖刀，以及玻璃器皿的滅菌。一般選用200℃左右的普通或遠(yuǎn)紅外消毒柜。

　　3、過濾滅菌器

　　用于一些酶制劑、激素以及某些維生素等不能高壓滅菌試劑的滅菌，主要有真空抽濾式和注射器式。

　　4、紫外燈

　　方便經(jīng)濟(jì)的控制無菌環(huán)境的裝置，緩沖間、接種室和培養(yǎng)室必備。

　�。ㄈ�）無菌操作設(shè)備

　　1、接種箱

　　是使用較早的簡(jiǎn)單的無菌裝置，主體為玻璃箱罩、入口有袖罩，內(nèi)裝紫外燈和日光燈，使用時(shí)對(duì)無菌室要求較高。

　　2、超凈工作臺(tái)

　　其操作臺(tái)面是半開放區(qū)，具方便、操作舒適點(diǎn)，通過過濾的空氣連續(xù)不斷吹出，大于0.03um直徑的微生物很難在工作臺(tái)的操作空間停留，保持了較好的無菌環(huán)境。由于過濾器吸附微生物，使用一段時(shí)間后過濾網(wǎng)易堵塞，因此應(yīng)定期更換。

　�。ㄋ模┡囵B(yǎng)設(shè)備

　　培養(yǎng)設(shè)備是指根據(jù)需要所選用的不同規(guī)格和控制精度的用于植物細(xì)胞、組織和器官培養(yǎng)的設(shè)施和設(shè)備。

　　1、培養(yǎng)架

　　目前所有植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室植株繁殖培養(yǎng)的通用設(shè)施。成本低、設(shè)計(jì)靈活、可充分利用培養(yǎng)空間，以操作方便、大限度利用培養(yǎng)空間為原則。一般有4-5層，層間間隔40-50cm，光照強(qiáng)度可根據(jù)培養(yǎng)植物特性來確定，一般每架上配備2-4盞日光燈。

　　2、培養(yǎng)箱

　　細(xì)胞培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)等要求精確培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)，可用光照培養(yǎng)箱、濕度控制培養(yǎng)箱等培養(yǎng)。

　�。ㄎ澹┢渌�設(shè)備

　　可安裝時(shí)間程序控制器、溫度控制系統(tǒng)或空調(diào)；實(shí)體顯微鏡、倒置式生物顯微鏡及配套的攝影、錄像和圖像處理設(shè)備。

　　四、培養(yǎng)容器與用具

　　培養(yǎng)容器指盛有培養(yǎng)基并提供培養(yǎng)物生長(zhǎng)空間的無菌置，培養(yǎng)用具指培養(yǎng)物接種封口所用的各種金屬或塑料制品，實(shí)驗(yàn)室必備。

　�。ㄒ唬┡囵B(yǎng)容器

　　包括各種規(guī)格的培養(yǎng)皿、三角瓶、試管、培養(yǎng)瓶。玻璃容器，一般用無色并不產(chǎn)生顏色折射的硼硅酸鹽玻璃材質(zhì)。塑料容器材質(zhì)輕、不易破碎、制作方便，廣泛使用。一般為聚丙烯、聚碳酸酯材料的培養(yǎng)容器。

　�。ǘ�）金屬用具

　　1、鑷子

　　植物組織解剖用小的尖頭鑷子，分株轉(zhuǎn)移繁殖轉(zhuǎn)接用槍型鑷子，16-22cm長(zhǎng)。

　　2、剪刀

　　不銹鋼醫(yī)用彎頭剪，做取材和切段轉(zhuǎn)移繁殖，14-22cm。

　　3、解剖刀

　　組織切段，多用短柄可換刀片的醫(yī)用不銹鋼解剖刀。

　　4、其他用具

　　接種鏟、接種針在花藥培養(yǎng)、花粉培養(yǎng)中有用。

　�。ㄈ�）塑料用具

　　各種封口膜、蓋、塑料盤及其它實(shí)驗(yàn)用具。

　　五、甘薯脫毒及脫毒種苗快繁技術(shù)

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　　選擇適合當(dāng)?shù)丨h(huán)境條件和市場(chǎng)需求的勢(shì)高產(chǎn)品種，取其10cm長(zhǎng)的健壯莖段，剪去葉片，消毒滅菌，具體方法是：流水沖洗8—10min，在70％乙醇中浸泡10—20s。再用0．1％多菌靈浸泡8min，0．1％升汞水消毒lOmin，后用無菌水沖洗5次。滅菌后對(duì)材料的處理及培養(yǎng)需在無菌條件下進(jìn)行。在解剖鏡下剝?nèi)ロ斞炕蛞秆可陷^大的幼葉，切取0．3mm左右?guī)�l一2個(gè)葉原基的莖尖組織，接種到莖尖培養(yǎng)基上培養(yǎng)，即可得到脫毒幼苗。一般脫毒率可達(dá)90％ 以上。

　　（二）莖尖培養(yǎng)及脫毒鑒定

　　莖尖培養(yǎng)用MS培養(yǎng)基，PH值調(diào)為5.8。在溫度25—28℃，光照強(qiáng)度l500—2000k，日光照12—14h條件下培養(yǎng)，20d左右莖尖組織可形成2—3mm小芽點(diǎn)，且基部形成黃綠色愈傷組織，此時(shí)需轉(zhuǎn)入MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)。當(dāng)幼苗長(zhǎng)劉5cm時(shí)，將莖尖幼苗進(jìn)行短枝試管切段快繁，除頂芽帶l 一2片展開葉外，其余切成每段帶一節(jié)一葉的短技，插于MS培養(yǎng)基本培養(yǎng)并進(jìn)行再繁殖(所需條件同上)。30d左右要形成具有6—8片展開葉的試管苗，合格后的脫毒苗再進(jìn)行快繁。